Культивирование эмбрионов #1

Культивирование эмбрионов

После получения ооцитов (яйцеклеток) в результате пункции яичников и аспирации содержимого фолликулов, чашку с ооцитами помещают в инкубаторы для культивирования. Цель культивирования in vitro - культивирование гамет и эмбрионов в условиях, максимально приближенных к условиям in vivo.

Для обеспечения соответствующей питательной среды используются специальные коммерческие культуральные среды. Среды содержат определенные концентрации компонентов, которые оказались основными для развития человеческого эмбриона, а именно, глюкозу, забуференные солевые растворы, синтетический заменитель сыворотки, пенициллин и другие.

Однако физиологическое pH (7,2 - 7,3) и температура (37 °С) поддерживаются в основном инкубаторами, в которых проводят культивирование. Культуральная среда содержит бикарбонатную буферную систему, использующую газообразный диоксид углерода для поддержания рН. Инкубаторы устанавливают и калибруют соответствующим образом, чтобы обеспечить точную концентрацию CO2 и температурные условия.

Установлено, что пониженная концентрация О2 в камере инкубатора оказывает положительное влияние на развитие эмбрионов, особенно на поздних этапах культивирования (4-6 день). Снижение концентрации кислорода внутри камеры достигается подачей газообразного N2. Поэтому для культивирования эмбрионов в медицинском центре Интерсоно Медикавер Групп используют инкубаторы, имеющие опцию подачи азота и контроля уровня О2 внутри камеры.

Ежедневно эмбриологи мониторят температуру и концентрацию газов внутри инкубатора, а также наблюдают за развитием эмбрионов и вносят данные в Протокол культивирования.

Нормальным темпам развития эмбриона отвечает:

2 день культивирования – стадия 2-4 бластомеров;

3 день культивирования – стадия 6-8 бластомеров;

4 день культивирования – стадия 10-12 бластомеров, компактизации или морулы;

5 день культивирования – стадия морулы или бластоцисты;

6 день культивирования – бластоциста.

Оценку ранних эмбрионов (2-3 день культивирования) проводят по двум показателям - количеству клеток (эластомеров) и их качеству.

Категории качества ранних эмбрионов:

А - эмбрионы не содержат фрагментации (фрагментация - небольшие участки цитоплазмы, которые не содержат генетического материала), симметричные бластомеры;

В - эмбрионы содержат незначительное фрагментацию (до 25%), большинство эластомеров симметричные;

С - у эмбрионов выраженная фрагментация > 25%, бластомеры асимметричные;

D - фрагментация эмбрионов составляет более 50%, бластомеры асимметричны.

На 5-6 день культивирования эмбрион достигает стадии бластоцисты. Оценку бластоцисты проводят по трем показателям - степень зрелости бластоцисты, качество внутриклеточной массы (ВКМ), из которой будет формироваться сам эмбрион и качество трофектодермы (ТЕ), из которой будут формироваться плодные оболочки.

Степени зрелости бластоцист:

І - ранняя бластоциста. Бластоцель менее половины объема эмбриона;

II - полная бластоциста. Бластоцель полностью занимает объем эмбриона;

III – разросшаяся бластоциста (експандированная). Бластоцель становится больше и начинает истончаться зона пеллюцида;

IV - трофектодерма начинает проникать через зону пеллюцида (хетчинг)

V – вылупившаяся бластоциста покинула зону пеллюцида.

Качество ВКМ оценивается как:

А - плотная, с большим количеством клеток;

В – свободное группирование среднего количества клеток;

С - незначительное количество клеток.

Качество ТЕ оценивается как:

А - много клеток, которые формируют трофектодермальный слой;

В - немного клеток;

С - незначительное количество крупных клеток.

Качество перенесенных эмбрионов коррелирует с наступлением беременности. В частности, чем быстрее темпы дробления, тем выше шансы имплантации таких эмбрионов. Но речь идет только о вероятности имплантации. То есть имплантироваться может как эмбрион хорошего качества, так и эмбрион «плохого» качества. Однако шансы имплантироваться у эмбрионов хорошего качества значительно выше. Также стоит помнить, что, оценивая качество эмбриона, мы говорим только о его темпах развития и морфологию (внешний вид), а не о генетическом статусе эмбриона.

Похожее